Melipona subnitida (“jandaíra”) is a species of stingless bee endemic to the Caatinga, a dry forest in the northeastern Brazilian semi-arid. Propolis is a product containing beeswax and plant resin. It contains compounds that can be able to prevent health problems by protecting cells against damage by oxidative agents. M. subnitida produces geopropolis, a mixture of propolis with soil. Samples of geopropolis of M. subnitida, one of inside and another outside of the nest from a hive in the municipality of Mossoró (northeastern Brazil) were analyzed by HPLC-PDA-ESI-MS/MS and their antioxidant activity evaluated by the DPPH and β-carotene/linoleic acid methods. Both samples exhibited similar chemical profile, characterized by 26 phenolic compounds, however, the compounds detected were more abundant in sample collected from inside of the nest. They were tentatively characterized as galloyl hexoses, coumaroyl-O-galloyl-hexoses, cinnamoyl-O-galloyl-hexoses, coumaroyl- and cinnamoyl- galloyl hexoses, phenylpropanoyl-O-benzoyl hexoses, flavanones and ellagitannins. Flavonoids, galloyl hexoses, coumaroyl-O-galloyl-hexosides, cinnamoyl-O-galloyl-hexosides and coumaroyl-cinnamoyl-galloyl hexosides were reported previously in this genus, however ellagitannins and phenylpropanoyl-O-benzoyl hexoses are reported for the first time. Comparing the antioxidant activity of the geopropolis samples from inside and outside of the nest, the latter was higher than the former.

ABSTRACT Due to their ecological and economic importance, honey bees have attracted much scientific attention, which has intensified due to the recent population decline of these insects in the several parts of the world. Among the factors related to these patterns, infection by pathogens are the most relevant, mainly because of the easy dissemination of these microorganisms. Although no zoonotic diseases are associated with these insects, the presence of infectious agents in bee products should still be considered because they play a role as disease dispersers, increasing the risk to animal health. Because of the possibility of dispersion of pathogens via bee products, this work aimed to identify the presence of spores of the pathogens Paenibacillus larvae, Ascosphaera apis and Nosema spp. in samples of honey, pollen and royal jelly that are registered with Brazil's Federal Inspection Service (S.I.F.) and commercially available in the state of São Paulo. Of the 41 samples of bee products analyzed, only one showed no contamination by any of these pathogens. N. ceranae and P. larvae had the highest prevalence considering all the samples analyzed (present in 87.80% and 85.37% of the total, respectively), with N. apis present in 26.83% and A. apis present in 73.17% of the samples. These results provide support for the formulation of government regulations for sanitary control of exotic diseases by preventing dispersion of pathogens, including through illegal importation, since local and international trade and the transfer of colonies between regions play important roles in the dispersion of these microorganisms.

RESUMO A geléia real pode conter grãos de pólen e sua presença pode ser usada para determinar a origem fitogeográfica do produto. Este estudo analisou a origem fitogeográfica de amostras comerciais de geléia real do Estado de São Paulo, com registro no Sistema de Inspeção Federal (SIF) brasileiro, que estavam contaminadas com os esporos da bactéria Paenibacillus larvae, causadora da doença Cria Pútrida Americana. Os grãos de pólen de Castanea apresentaram a maior porcentagem total, com menores percentuais de Cirsium/Carduus, Cistus, Parthenocissus, Prunus, Quercus, Robinia, Scrophulariaceae, Taraxacum, Tilia, dentre outros. Este espectro polínico é incompatível com amostras de geléia real produzidas no Brasil. O espectro polínico assemelhou- se ao de um produto importado, compatível com a origem do Hemisfério Norte. A legislação brasileira não exige que a origem fitogeográfica dos produtos apícolas importados seja analisada por procedimentos palinológicos, mas é obrigatório ter um certificado atestando a ausência de patógenos emitido pelo país de origem, monitorado com o objetivo de impedir que doenças exóticas penetrem no Brasil. A palinologia, portanto, provou ser fundamental na detecção de importações desses lotes contaminados.

ABSTRACT Royal jelly may contain pollen grains and their presence can be used to determine the phytogeographical origin of the product. This study analyzed the phytogeographical origin of commercial royal jelly samples from São Paulo State, tested as part of the Brazilian Federal Inspection System (SIF), found to be contaminated with spores of the bacterium Paenibacillus larvae, that causes the American Foulbrood Disease. The pollen grains of Castanea had the highest total percentage, with lower percentages of Cirsium/Carduus, Cistus, Parthenocissus, Prunus, Quercus, Robinia, Scrophulariaceae, Taraxacum, Tilia, among others. This pollen spectrum is incompatible with royal jelly samples produced in Brazil. The pollen spectrum resembled that of an imported product, compatible with the Northern Hemisphere origin. Brazilian legislation does not require the phytogeographic origin of imported bee products to be analyzed by palynological procedures, but it is mandatory to have a certificate issued by the country of origin attesting the absence of pathogens, monitored with the objective of preventing the exotic diseases from entering Brazil. Palynology, therefore, proved to be fundamental in detecting imports of this contaminated batches.

Procurou-se conhecer a flora de importância polinífera para Apis mellifera (L.) na região de Viçosa, MG, em período de entressafra de mel, entre agosto e dezembro de 2005. O experimento foi realizado em dois apiários distintos, cada um com cinco colmeias. As cargas retidas nos coletores de pólen instalados nas colmeias foram analisadas quanto à origem botânica. As plantas em floração no entorno dos apiários foram coletadas e identificadas. A maioria das plantas de importância polinífera para abelhas na região de Viçosa era nativa, localizada em jardins e com hábito arbóreo. Pela análise palinológica, verificou-se que espécies como Anadenanthera colubrina, Arecaceae sp., Baccharis dracunculifolia, B. melastomaefolia, Coffea spp., Emilia sagittata, Eugenia uniflora, Mikania cordifolia, M. hirsutissima, Myrcia fallax, Psidium guajava, Vernonia condensata, V. diffusa, V. lanuginosa e V. mariana são potenciais recursos poliníferos a serem utilizados no período de entressafra do mel. Os resultados indicaram a importância de plantas localizadas em áreas abertas para o forrageamento de pólen por A. mellifera e confirmaram o potencial polinífero da região estudada, durante o período de entressafra do mel.

The objective of this work was to study flora of polliniferous importance for Apis mellifera (L.) in the region of Viçosa-MG, during the period between honey harvests from August to December, 2005. The experiment was carried out in two different apiaries, each one with five beehives. The pellets retained in the pollen collectors in the beehives were analyzed with respect to their botanical origin. The flowering plants surrounding the apiaries were collected and identified. Most plants of polliniferous importance for the bees in the Viçosa region were native, located in gardens and with arboreal habitus. The palynological analysis showed that species such as Anadenanthera colubrina, Arecaceae sp., Baccharis dracunculifolia, B. melastomaefolia, Coffea spp.s are potential polliniferous resources to be used during the period between honey harvests. The results indicate the importance of plants located in open areas for pollen scavenging by A. mellifera, confirming the polliniferous potential of the studied area during the period between honey harvests.

A cria ensacada brasileira é uma das piores enfermidades de abelhas Apis mellifera L. africanizadas, principalmente do Sudeste do Brasil. Ela afeta o desenvolvimento das larvas, após serem alimentadas pelas abelhas nutrizes com o pólen do barbatimão (Stryphnodendron polyphyllum e Stryphnodendron adstringens), ocasionando a morte entre os estágios de pré-pupa e pupa. O objetivo deste trabalho foi verificar o efeito do substituto de pólen na redução da mortalidade da cria ensacada brasileira durante o florescimento do Stryphnodendron adstringens. Foram utilizados dois tratamentos: as colmeias do tratamento 1 receberam semanalmente substituto de pólen (mistura de farinha de soja, fubá e farinha de trigo em proporções iguais). As colmeias do tratamento 2 não receberam o substituto de pólen, tendo como único alimento o pólen que encontravam na natureza. As colmeias alimentadas apresentaram diferença significativa de 93,5% de viabilidade de sobrevivência de cria em relação às não alimentadas, que apresentaram 80,4% de sobrevivência. A frequência de pólen S. adstringens nos coletores de pólen, no tratamento 1, foi 0,21. Entretanto, no Tratamento 2, foi de 4,38, indicando que as colmeias que não se alimentaram com o substituto apresentaram maior frequência do pólen dessa planta, quando comparadas com as que dispunham da dieta artificial. Esse manejo sugere que a oferta do substituto de pólen, antes e durante a florada do Stryphnodendron adstringens, é importante na redução dos efeitos da cria ensacada brasileira em enxames de abelhas africanizadas.

Brazilian sac brood is one of the worst diseases of Apis mellifera L. mainly in southeast Brazil. This disease affects the larval development after having been fed with "barbatimão" pollen (Stryphnodendron polyphyllum and Stryphnodendron adstringens); the workers become intoxicated and die between the prepupae and pupae stages. This study verified the effect of pollen substitute on the reduction of Apis mellifera L. mortality, caused by Brazilian sac brood during Stryphnodendron adstringens flowering. Two treatments were used: in treatment one, colonies received pollen substitute weekly (a blend of a soy flour, maize flour and wheat flour of equal proportions). The hives of treatment 2 didn´t receive the replacement of pollen substitute, receiving only the pollen found in nature. The hives which were fed with the pollen substitute had significant difference of 93.5% of brood survival viability when compared to non-fed which had 80.4% of survival. The frequency of pollen S. adstringens in pollen traps, in treatment 1, was of 0.21. However, in treatment 2, the frequency was of 4.38, indicating that the hives that were not fed with the substitute showed a higher frequency of pollen of this plant when compared with those who had the artificial diet. The results suggest that supplying with pollen substitute, before and during Stryphnodendron adstringens flowering, is important in reducing the effects of Brazilian sac brood disease.

A coleta de Cladosporium sp. por abelhas (Apis mellifera L.) foi observada no Brasil em um apiário localizado em Minas Gerais, no período de 10 a 23/11/05, caracterizado pela alta umidade relativa do ar e escassez de recurso alimentar (pólen e néctar). A composição nutricional das bolotas de fungos apresentou alto valor protéico, extrato etéreo e matéria orgânica.

Cladosporium sp. collection by bees (Apis mellifera L.) was observed in Brazil at an apiary located in Minas Gerais, during November10-23, 2005, characterized by high air relative humidity and low availability of food resources (pollen and nectar).The nutritional composition of the fungi pellets presented high protein value, ethereal extract and organic matter.

Amostras de cargas de pólen de 10 colméias de Apis mellifera (L.) foram analisadas quanto a sua composição físico-química e origem botânica, tomando-se a coloração como parâmetro para o controle de qualidade. Em sete amostras foi possível estabelecer a ocorrência de mais de 80% de um único tipo polínico, caracterizando-as como monoflorais, porém com variações nos valores protéicos. Uma das amostras era composta exclusivamente por fungos saprofíticos (Cladosporium sp.). Comparando-se as bolotas de fungos com os resultados médios dos componentes nutricionais das bolotas de pólen, as primeiras apresentaram maior valor protéico, matéria mineral e matéria seca e menores valores de matéria orgânica, extrato etéreo ecarboidratos totais. As amostras monocromáticas estiveram de acordo com as especificações físico-químicas reguladoras da qualidade de pólen apícola. Os resultados demonstram que a coloração homogênea das cargas de pólen não se apresentou como um bom indicativo de pólen monofloral e confirma a importância das análises físico-químicas e melissopalinológicas para a caracterização da qualidade do pólen apícola a ser comercializado.

Pollen load samples from 10 hives of Apis mellifera (L.) were analyzed based on their physicochemical composition and botanical source, considering color as a parameter for quality control. In seven samples it was possible to establish the occurrence of more than 80% of a single pollen type, characterizing them as unifloral but with protein content variation. One of the samples was exclusively composed of saprophytic fungi (Cladosporium sp.). Comparing the mean results of the fungi loads with those of the nutritional components of pollen load, the former presented higher protein, mineral matter and dry matter and lower organic matter, ethereal extract and total carbohydrate values. The monochromatic samples met the physicochemical specifications regulating pollen load quality. The results showed that homogeneous coloration of the pollen load was not found to be a good indication of unifloral pollen, confirming the importance of physicochemical analysis and melissopalynological analysis for characterization of the quality of commercial pollen load.

Este trabalho teve por objetivo avaliar os vários critérios de subamostragens empregados na análise melissopalinológica de cargas de pólen coletadas por abelhas Apis mellifera (L.) africanizadas. O experimento considerou quatro diferentes pesos de subamostras (0,5; 1,0; 2,0 e 5,0 g) retiradas de lotes de cargas de pólen heteroflorais de 60 g, 100 g e 200 g. A riqueza de tipos polínicos foi maior em subamostras de maior peso (p = 0,006), no entanto, tipos polínicos adicionais ocorreram com baixa representatividade. O peso da subamostra não influenciou na mudança da classe de frequência dos principais tipos polínicos (p = 0,263). Houve um maior número de trocas de posições na classificação dos principais tipos polínicos com a redução do tamanho do grão de pólen (p = 0,001). Os resultados indicaram o uso de subamostragens de 5 g para estudos de avaliação da riqueza de tipos polínicos em amostras heteroflorais, entretanto, subamostragem de 0,5 g não limitou a avaliação dos principais tipos polínicos.

The aim of this study was to evaluate various criteria of sub-sampling used in melissopalynological analysis of pollen loads collected by the africanized Apismellifera (L.) honeybees. The experiment included four different sub-sample weights (0,5; 1,0; 2,0; 5,0 g), taken from 60 g, 100 g and 200 g samples of heterofloral pollen loads. The richness of pollen types was higher in the heavier sub-samples (p = 0,006), however, the additional pollen types occurred with low representativity. The weight of the sub-sample did not influence the change of frequency class in the predominant pollen types (p = 0,263). There was a bigger shift of classification positions of the predominant pollen types with a reduction of the size of the pollen grain (p = 0,001). The results pointed to the use of sub-sample of 5 g for evaluation of the richness of the pollen types in heterofloral samples, however, sub-sample of 0,5 g did not limited the evaluation of the predominant pollen types.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência das composições florísticas locais sobre a qualidade do pólen apícola, em dois apiários de Minas Gerais. Em cada apiário, foram instaladas cinco colméias de Apis mellifera (L.). A flora polinífera foi identificada nas proximidades dos apiários. As bolotas de pólen foram coletadas de agosto a dezembro de 2005. A análise melissopalinológica foi realizada pelo método padrão europeu. Foram realizadas análises nutricionais do pólen relativas à porcentagem de matéria seca, orgânica e mineral, à proteína bruta, ao extrato etéreo e aos carboidratos totais. Foi realizada correlação de Spearman entre os componentes nutricionais e os tipos polínicos ocorrentes. No apiário UFV, a flora polinífera predominante apresentou espécies ornamentais com hábito arbóreo, e no apiário Mesmel predominaram as espécies da pastagem abandonada com hábito herbáceo. A composição nutricional do pólen coletado não apresentou correlação com a diversidade de tipos polínicos, mas apresentou correlação com a predominância de tipos polínicos específicos. As diferentes composições florísticas influenciam na qualidade do pólen apícola, e a coleta em diversas fontes de alimento, pelas abelhas, é importante para a obtenção de uma dieta mais equilibrada.

The objective of this work was to assess the influence of the local floral composition on the quality of apicultural pollen collected in two apiaries, in Minas Gerais State, Brazil. Five hives of Apis mellifera (L.) were installed in each apiary. The polliniferous flora in the proximity of the apiaries was identified. The pollen loads were collected from August to December, 2005. The melissopalinological analysis was carried out following the standard European method. Nutritional analyses of pollen were performed related to percentages of dry, organic and mineral matter; to raw protein; to ether extract; and to total carbohydrates. Spearman correlation was carried out between nutritional components and pollen types. In the UFV apiary, the predominant polliniferous flora presented ornamental species with arboreous habitus, and in the Mesmel apiary, it presented species of abandoned cattle pasture with herbaceous habitus. The nutritional composition of the collected pollen showed no correlation with the diversity of pollen types, however, it showed correlation with the predominance of specific pollen types. Different floral compositions influence the quality of pollen collected by bees; and its collection by bees, in various sources, is important to obtain a more balanced diet.

The pentacyclic triterpenoid bauer-7-en-3beta-yl acetate was obtained from the chloroform extract of an unusual sample of propolis from southeast Brazil with the yield of 7%. The compound was identified by comparison of IR, MS and NMR analysis with published data.

A técnica de criação de larvas de abelhas Apis mellifera em laboratório tem sido utilizada freqüentemente em estudos de desenvolvimento larval, determinação de castas e, mais recentemente, em testes de patogênese. A quantidade e a qualidade do alimento fornecido às larvas em laboratório podem levar à formação de castas diferentes (rainha, operárias ou intercastas). Neste trabalho, crias de abelhas africanizadas foram desenvolvidas a partir de larvas de 18-24 horas de idade até atingir a fase adulta, utilizando-se durante a alimentação, 4, 15, 25, 50 e 70 µl de dieta por larva, respectivamente, do primeiro ao quinto dia de alimentação. Para determinar se as abelhas adultas obtidas em laboratório eram pertencentes à casta de operárias, de rainhas ou se eram intermediárias (intercastas), foram comparadas com um controle constituído por operárias e rainhas da mesma origem das operárias desenvolvidas no laboratório, utilizando-se o peso e as medidas dos seguintes caracteres: a) comprimento da cabeça; b) largura da cabeça; c) comprimento do olho composto; d) largura do olho composto; e) comprimento do mesoscuto; f) largura do mesoscuto; g) comprimento da tíbia; h) largura da tíbia. Foram utilizadas a Função Discriminante de Anderson e a técnica de Componentes Principais, de modo a efetuar a discriminação das castas das abelhas adultas obtidas em laboratório em relação àquelas desenvolvidas naturalmente. Entre os caracteres avaliados, os que menos contribuíram para a determinação das castas foram o comprimento do mesoscuto e a largura da cabeça, sendo, portanto, dispensáveis em estudos futuros.

Apis mellifera honeybee brood rearing in laboratory conditions has been frequentely used to search for larval development, caste determination, and more recently for tests of pathogenesis. The amount and quality of food received by larvae during the feeding time can produce different castes (queen, worker or intercaste). In the present work, brood were reared from larvae with 18-24 hours old to adult bee stage and fed 4, 15, 25, 50 e 70 µl of a special diet . To determine if the adult bees obtained in laboratory conditions were worker, queen caste or intercaste, they were compared with worker and queen adult bees obtained in natural conditions from the same colony. To discriminate the caste, the weight and the measures of the following characters were used: a) length of head; b) width of head; c) length of compound eyes; d) width of compound eyes ; e) length of mesoscutum; f) width of mesoscutum; g) length of tibia; h) width of tibia. Anderson Function Discriminant and the technique of Main Components were used to allow the discrimination of the caste of Apis mellifera obtained in laboratory conditions compared with worker and queen naturally obtained. Among the studied characteres the ones that fewer contributed to the determination of the castes were the length of the mesoscuto and the width of the head. These characteres can be discarded in future studies.

A sensibilidade, in vitro, de amostras de Staphylococcus aureus, Staphylococcus sp. coagulase negativos, Streptococcus agalactiae e bactérias do grupo dos coliformes, isoladas do leite de vacas com mastite, a diferentes extratos de própolis, na concentração de 100 mg/ml, foi avaliada pela técnica do antibiograma em discos de papel de filtro com sobrecamada de meio de cultura. Os resultados mostraram que o extrato etanólico de própolis comercial, os extratos etanólico e, em menor proporção, o metanólico inibiram o crescimento das amostras de bactérias Gram-positivas, Staphylococcus aureus, Staphylococcus sp. coagulase negativos e Streptococcus agalactiae. Os extratos obtidos através da água, do acetato de etila e do clorofórmio não inibiram nenhuma amostra bacteriana, assim como os veículos etanol e metanol puros utilizados como controle. A bactéria Gram-negativa testada, do tipo coliforme, não apresentou sensibilidade a nenhum dos extratos. Verificaram-se diferenças significativas (p < 0,05) na sensibilidade aos extratos entre amostras bacterianas de uma mesma espécie, mas de origens diferentes. Nas amostras de Streptococcus agalactiae, os diâmetros dos halos de inibição do crescimento bacteriano ao redor do disco foram maiores que aqueles observados para as amostras de Staphylococcus aureus e Staphylococcus sp. coagulase negativos. Todos estes resultados estimulam o prosseguimento de novas pesquisas sobre a utilização de extratos de própolis, em veículos adequados, com vistas ao tratamento da mastite bovina.

In vitro, the sensitivity to different propolis extracts, at a concentration of 100 mg/ml, of Staphylococcus aureus, Staphylococcus sp. coagulase negative, Streptococcus agalactiae and bacteria of the coliform group, isolated from the milk of cows with mastitis, was evaluated using the technique of an agar disk diffusion with a medium doublelayer. The results showed that the commercial propolis, the ethanolic extract, and, in a minor proportion, the methanolic extract inhibited the growth of the Gram positive bacteria, Staphylococcus aureus, Staphylococcus sp. coagulase negative and Streptococcus agalactiae. The extracts obtained through water, etila acetate and chloroform did not inhibit any bacterial strains, nor did the pure ethanol and methanol vehicles that were utilized as controls. The Gram negative bacterium tested, from the coliform group, did not show sensitivity to any extract. Bacterial strains of the same species collected from different sources presented significant differences in sensitivity to the extracts (p < 0.05). In the Streptococcus agalactiae samples, the diameters of the zone of inhibition around the disks were bigger than those observed for samples of Staphylococcus aureus and Staphylococcus sp. coagulase negative. The results of this experiment stimulate the continuation of studies on the use of propolis extracts, by means of using the appropriate vehicles for the treatment of bovine mastitis.